百香果无病毒优质种苗繁育技术

　　一、技术概述

　　（一）技术基本情况

　　百香果是中国新兴果树，2017年福建省人民政府就将其列入重点扶持的特色果业。2020年福建省栽培面积20万亩，产值达50亿。病毒病是福建省百香果产业发展的最主要障碍，2017年全省发病率超30%。针对福建省百香果病毒种类不清、快速检测技术缺乏等突出问题，福建省农业科学院果树研究所、福建省种植业技术推广总站等单位通过多年努力，创建了高效的百香果病毒病原鉴定技术及百香果病毒快速、准确的检测技术体系，研究制定了福建省地方标准《百香果（西番莲）病毒检测技术规程》，集成创新了百香果无病毒种苗生产技术体系，并研究制定了福建省地方标准《百香果（西番莲） 育苗技术规范》。通过该技术，不仅实现了福建省的苗木自给，还大量供应全国，避免了病毒病暴发为害，促进了福建省百香果优势特色主导产业形成，社会、经济和生态效益显著。

　　（二）技术示范推广情况

　　近三年，该技术为福建省百香果优势特色主导产业发展专项、福建百香果产销联盟等10家大型育苗企业提供母本园、采穗圃、苗木的病毒监测、病毒防控及种苗繁育等技术服务，累计繁育无病毒优质种苗4574万株，推广面积超45万亩，大力推进了福建省百香果无病毒种苗标准化生产。

　　（三）提质增效情况

　　2017-2018年福建省百香果病毒病为害严重，在福建龙岩、宁德、漳州等地区约30%的果园感染病毒，尤其是在百香果种植新区，带毒苗木长势慢，产量极低，严重影响了农户的种植热情。近三年来，项目组及时提供的病毒检测及无病毒种苗繁育技术，规范了福建省百香果无病毒种苗生产，改变了早期粗放的“以苗育苗”现象，通过推广无病毒种苗生产，新增效益15.235亿元，推广无病毒种苗面积超过45万亩，约占我国百香果栽培面积的1/3，避免了中国百香果病毒病爆发，不仅挽回巨大经济损失，还提升了农户的种植积极性，保障产业高速发展，社会、经济和生态效益显著。

　　（四）技术获奖情况

　　“百香果（西番莲）病毒鉴定、检测技术研发与应用”获2021年度福建省农业科学院科技创新一等奖。

　　“百香果（西番莲）病毒鉴定、检测技术研发与应用”获2021年度福建省科学技术进步三等奖。

　　二、技术要点

　　（一）百香果病毒病原快速鉴定及检测

　　选取13种亚洲百香果病毒建立“RNA提取、文库构建和测序、测序数据分析、病毒种类初步筛选、sRNA 拼接和注释、PCR验证”的已知病毒鉴定技术体系（图1），未验证病毒采用RACE同源获取、分段克隆进行全基因组测定，经GenBank比对，通过核苷酸和氨基酸同源性进行鉴定。该鉴定技术体系充分发挥了NGS的非序列依赖性、不受培养或分离条件限制、可同时检测全部已知与未知病毒的优点，克服了生物学测定法、电镜观察等传统病毒检测方法鉴定效率低的弊端。

　　建立简并引物快筛3大类病毒、特异性引物检测9种病毒的RT-PCR检测技术体系，检测时间缩短至3小时，是ELISA检测时间的1/3，灵敏度提高103倍。研发制备了具自主知识产权的TeMV、PLV、EAPV的特异性抗体及血清学ELISA和TeMV检测试剂盒；建立了三大类病毒通用简并引物、血清学ELISA快筛技术; 针对不同检测对象，实验室检测的TC-PCR、多重PCR、多重实时荧光PCR等快速检测技术。实现了对百香果病毒的大量、快速、准确检测。

　　（二）百香果无病毒优质种苗繁育技术

　　通过母本园、采穗圃建设，建立标准化大棚的苗木繁育模式，杜绝地栽苗，实施“物理隔离、虫媒防治、工具消毒、秋冬监控”病毒防控，构建了以病毒监测、物理隔离为核心的无病毒种苗生产技术体系；制定福建省地方标准《百香果(西番莲)育苗技术规范》(DB35/T 1991-2021)。

　　1、圃地选择

　　育苗圃应远离烟草、瓜类、豆类、茄科蔬菜等植物，背风向阳，排水良好，地下水位在1m以下；育苗大棚宽6～8m，高2.8～3.0m；采穗圃应选择品种纯正、无病虫害和生长健壮的百香果果园，具备防虫网等物理隔离条件。

　　2、扦插育苗

　　（1）苗床和营养杯制备

　　基质宜选用育苗专用基质，配方为菜园土：草炭土：细河沙=4:1:1，喷施50%多菌灵300～500倍液消毒备用。苗床底部铺设塑料薄膜，基质平摊10～12cm高。营养杯直径≥6cm、高度≥8cm，加基质至3/4，装杯后整齐排放。育苗前2～3d浇透水，相对湿度70%～80%。

　　（2）插穗处理

　　选用健壮、无病虫害、腋芽饱满、茎直径0.4cm左右半木质化枝条作为插穗，切成10～15cm小段，每个枝段含1～2个节，去掉基端节上叶片，留上节的1片叶，剪除叶片2/3，扦插端削斜口。每30～50个枝段扎成一捆，用吲哚丁酸（IBA）等生根剂浸泡处理。

　　（3）扦插

　　取处理过的插穗，将斜口端2/3插入苗床，株行距为4cm×8cm。当枝条切段腋芽长出3～4片叶片时移栽至营养杯。

　　3、嫁接育苗

　　（1）砧木培育

　　砧木应采用完全成熟、颜色深紫（黄）、果皮稍皱缩的果实的种子，挖出果瓤，去除假种皮，洗净阴干，25℃～30℃热水浸泡24h即可播种。砧木苗长至7cm～8cm时，将苗移栽至穴盘，经肥水管理，60d～70d砧木苗长至16cm～20cm、直径＞0.3cm 时，即可进行嫁接。

　　（2）苗床制作

　　在温室大棚内制作宽1.8m～2.0m、高70cm～80cm的铁架，上面铺设塑料薄膜，苗床平行排列，间隔1.1m～1.2m为走道。

　　（3）基质

　　基质宜选用育苗专用基质，配方为菜园土：草炭土：细河沙=4:1:1，喷施50%多菌灵300～500倍液消毒备用。

　　（4）接穗修剪

　　选用健壮、无病虫害、腋芽饱满、茎直径0.4cm左右半木质化枝条作为接穗，每条枝条10节左右。枝条剪成枝段，每个枝段留1个带叶片的芽眼，芽眼上端枝条留1cm～2cm，下端留2cm～3cm，剪除叶片2/3，接穗端两边削斜口。

　　（5）嫁接

　　嫁接时砧木从基部往上留3～5片叶，其余以上部位平剪去除，采用劈接法将接穗接入砧木，嫁接口用塑料管套住，保证接穗与砧木紧密结合。7d后检查嫁接成活率，接穗的尾叶竖立未黄化表明嫁接成活，接穗尾叶低垂或黄化表明嫁接未成活，需重新嫁接。

　　（6）移苗

　　嫁接成活的苗木转入大棚培育。移苗时忌剧烈抖动，以防接穗与砧木脱离，及时抹去砧木的腋芽。

　　4、苗期管理

　　扦插后15d或嫁接后15d左右喷施0.2%磷酸二氢钾叶面肥，每隔7d喷一次，连喷3～4次。保持棚内温度20℃～25℃，并每隔10d喷施50%多菌灵800～1000倍液预防病害，连续施药2次。

　　三、适宜区域

　　福建各百香果产县（市、区）均适宜推广应用。

　　四、注意事项

　　无病毒优质种苗繁育过程中应注意选择40目防虫网进行物理隔离，注意蚜虫、蓟马等虫媒监测与防治，并在修剪、嫁接等农事操作时注意工具消毒。

　　五、技术依托单位

　　技术依托单位1：福建省农业科学院果树研究所；

　　地址：福州市晋安区新店镇埔垱104号省农科院综合实验中心，

　　邮编：350012；

　　联系人：李韬；

　　联系电话及手机号：0591-87573907；

　　电子邮箱：leetao06@163.com

　　技术依托单位2：福建省种植业技术推广总站；

　　地址：福州市鼓楼区华林路123号，

　　邮编：350001；

　　联系人：施清；

　　电子邮箱：fjsqing@126.com